Dot-ELISA是由Hawkes等建立。用吸附蛋白質能力很強的硝酸纖維素膜（NC膜）為載體，將少量抗原（1～2μL）點加于膜上，干燥后經過封閉液處理；滴加待檢血清和酶標抗抗體（間接法），或是先在NC膜上滴加待檢血清（2～5tzL），干燥后加封閉液處理；滴加特異性抗原和酶標抗體（雙抗體夾心法）進行反應。
洗滌后滴加能形成不溶性有色沉淀的底物溶液（HRP常用二氨基聯苯胺、4-氯乙萘酚）。陽性反應在膜上出現肉眼可見的著色斑點。Dot-ELISA常用于篩選單克隆抗體雜交瘤細胞；在各種病毒性疾病和寄生蟲病的臨床診斷與血清流行病學調查中亦廣泛使用。
此法具有以下優點：
①特異性強，假陽性較少；
②敏感性高，NC膜對蛋白質的吸附性能優于聚苯乙烯，可檢出lng抗腺病毒IgC；檢出抗原的敏感性較常規ELISA試劑盒法高6～8倍；
③試劑用量少，比ELISA法至少節約10倍；
④操作簡便快速，不需要特殊設備條件，適合基層單位使用；
⑤抗原膜保存期長，—20％可保存半年，不影響其活性；并可郵寄供現場流行病學調查使用；
⑥檢測結果可長期保存，便于復查。