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酶聯免疫試劑盒競爭法測定小分子藥物時的酶標記物

2013-10-04 [1148]

 隨著政府對食品安全的檢測額重視程度,越來越多的藥物殘留小分子檢測試劑盒出現,酶聯免疫試劑盒競爭法試劑盒是其中的主力軍,在采用酶聯免疫競爭法檢測小分子藥物的模式中常用的方法有:
1. 包被抗原,酶標二抗進行的間接競爭法,該方法的好處在于對*抗體不存在操作影響(沒有認為的進行標記或其他處理),一抗活性好,并且抗原的包被一般不會出現過量包被造成IC50值較高,靈敏度降低的情況!但是該方法需要進行兩次洗板操作過程麻煩,并且陰性OD值一半不會很高,多在2.0以下!線型范圍較小,度較低!
2. 包被抗原,酶標一抗進行的標記抗體直接競爭法,該方法的好處在于操作簡單,一步完成,包被一般不會出現過量包被造成IC50值較高,并且游離的抗原更容易和標記的抗體進行反應,靈敏度和度較高,陰性顯色多在3.0以上。但是對于一抗進行標記難度較大,標記和后期純化需要花費功夫!
3. 包被抗體,標記抗原進行的標記抗原直接競爭法,該方法的好處在于操作簡單,一步完成,由于標記的抗原帶有HRP相對游離的抗原與包被的抗體更容易結合,并且小分子標記后容易純化分離,沒有偶聯的小分子通過透析即可除去,并且包被一抗對抗體的活性沒有明顯影響!但是該方法采用包被抗體的方法很容易造成包被過量影響IC50值,并且小分子的標記通常不能采用經典的過碘酸鈉法,需要采用其他的化學方法,EDC。NHSEDC等,對酶的活性有一定的影響。
個人通過近期一些實驗證明,直接競爭法IC50和線型范圍明顯優于間接競爭法,標記抗原和標記抗體相對來說標記抗原要稍好一些,關鍵在于后期純化方便!拋磚引玉!!!希望大家能夠針對此問題進行專題討論!重點在于抗原抗體的標記,以及抗原的合成改造!