1．標本貯存時間過長 標本在2～8~C下保存時間過長，IgG可聚合成多聚體，在間接法ELISA試劑盒測定中會導致本底過深、甚至造成假陽性。血清標本如是以無菌操作分離，則可以在2～8~C下保存1周，如為有菌操作，則建議冷凍保存。樣本的長時間保存，應在一70~C以下。
2．標本溶血 要注意避免出現嚴重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團，其有類似過氧化物的活性，因此，在以HRP為標記酶的ELISA 測定中，如血清 標本中血紅蛋白濃度較高，則其就很容易在溫育過程中吸附于固相，從而與后面加入的HRP底物反應顯色。
3．ELISA試劑盒冷凍保存標本避免反復凍融 冷凍保存的血清標本須注意避免因停電等造成的反復凍融。標本的反復凍融所產生的機械剪切力將對標本中的蛋白等分子產生破壞作用，從而引起假陰性結果。此外，凍融標本的混勻亦應注意，不要進行劇烈振蕩，反復顛倒混勻即可。此外，標本在保存中如出現細菌污染所致的渾濁或絮狀物時，應離心沉淀后取上清檢測。
4．標本凝固不全 血液采集后，如收集管中無促凝劑和抗凝劑，則血液通常在半小時后開始凝固，18～24h*凝固。日常檢驗中，常在血液還未開始凝固時即離心分離血清，此時因血液沒有*凝固，離出的“血清”并非為*的血清，其中仍殘留部分纖維蛋白原，如將其加入微孔中，在ELISA測定過程中仍可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊，易造成假陽性結果。因此，血液標本采集后，應使其充分凝固后再分離血清，或標本采集時用帶分離膠的采血管或于采血管中加入適當的促凝劑。
5．標本被細菌污染 樣本的采集及血清 分離中要注意盡量避免細菌污染，一則細菌的生長，其所分泌的一些酶可能會對抗原抗體 等蛋白產生分解作用；二則一些細菌的內源性酶如大腸桿菌的p—半乳糖苷酶本身會對用相應酶作標記的ELISA試劑盒測定方法產生非特異性干擾。