白介素試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預(yù)先包被白介素捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的。顏色的深淺和樣品中的白介素呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，計算樣品濃度。
 

　　從六個方面認(rèn)識白介素試劑盒：
 

　　1.靈敏度：為試劑檢出被檢物質(zhì)的低量的能力和試劑對大量樣品中陽性檢出的能力。
 

　　2.特異性：常用交叉反應(yīng)率表示。含有與待測物相近結(jié)構(gòu)部分的物質(zhì)可能存在交叉反應(yīng)，使測定結(jié)果升高，可能導(dǎo)致假陽性，所以交叉反應(yīng)是評價其質(zhì)量的關(guān)鍵指標(biāo)。
 

　　3.精密度：一般指其批內(nèi)CV%，其值應(yīng)小于15%；定量試劑應(yīng)同時考察線性范圍。
 

　　4.準(zhǔn)確度：通過添加回收實驗進(jìn)行評價。
 

　　5.安全性：指試劑對操作者和環(huán)境安全無害無傳染性。
 

　　6.經(jīng)濟(jì)性：試劑在同等質(zhì)量條件下通過大規(guī)模生產(chǎn)或技術(shù)進(jìn)步降低成本，而市場價格比較合理。
 

　　白介素試劑盒操作步驟：
 

　　1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
 

　　2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；
 

　　3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。
 

　　4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
 

　　5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液(350μL)，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。
 

　　6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
 

　　7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。