ELISA實驗時，留意事項如下：
正式實驗時，應分別以陽性對照與陰性對照控制實驗條件，待檢樣品應作一式二份，以確保實驗結果的準確性。有時本底較高，闡明有非特異性反響，可選用羊血清、兔血清或BSA等關閉。
在ELISA中，進行各項實驗條件的挑選是很重要的
實驗其中包括：
1）固相載體的挑選：許多物質可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進行挑選：用等量抗原包被，在同一實驗條件下進行反響，調查其顯色反響是否均一性，據此判明其吸附性能是否良好。
2）包被抗體（或抗原）的挑選：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時間及其蛋白量也有一定影響,一般多選用4℃18～24小時。蛋白質包被的zui適濃度需進行滴定：即用不同的蛋白質濃度（0.1、1.0和10μg／ml等）進行包被后，在其它實驗條件相同時，調查陽性標本的OD值。挑選OD值zui大而蛋白量zui少的濃度。關于多數蛋白質來說通常為1～10μg／ml。
仔細閱讀闡明書
1.確認試劑盒在有效期內
2.按闡明書確認一切試劑*（數量、體積）
3.標本制備要規范，每份標本體積要按2-3個復孔以上的量制備（貯存），盡量分裝做備份。短期內無法實驗者，留意低溫保存
4.準備好一切實驗額定所需物品，如試管、吸頭、移液器、離心機等
5.依據檢測標本數量確認所需試劑的量
6.按闡明書將所用試劑平衡至室溫，制造所需試劑
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